Визначення ефективного способу стерилізації рослинних експлантів лайма Citrus aurantifolia та сортів лимона Citrus lemon для введення в культуру in vitro

Abstract

Цитрусові рослини, які вирощують у горщику, користуються незмінним попитом, однак розмноження таких рослин потребує використання зимової теплиці та декількох добре розвинених маточних рослин для отримання садивного матеріалу. Використання мікроклонального розмноження дає змогу прискорити отримання насіннєвого матеріалу, однак вимагає детального розроблення методики культивування in vitro. Метою досліджень було вивчення ефективності стерилізаційних речовин і способів стерилізації на вихід життєздатних мікропагонів рослин лайма (Citrus aurantifolia) та сортів лимона Мейєра та Ювілейний та їх ріст у культурі in vitro. Дослідження проводили на базі міжкафедральної біотехнологічної лабораторії агробіотехнологічного факультету БНАУ. Вихідним матеріалом використовували мікропагони з рослин лайма (Citrus aurantifolia) та сортів лимона (Citrus lemon) Мейєра та Ювілейний. Об’єкти дослідження обрано за різнорідністю генотипів, типом розвитку та сортовими особливостями. Особливістю культури in vitro є можливість використання для розмноження різних частин рослин. У дослідженнях використано мікропагони з брунькою. Для знешкодження екзогенної бактеріальної та грибкової мікрофлори використовували 70 % розчин етанолу С๗Н๚ОН, гіпохлорит натрію 5 %, 15 % розчин пероксиду водню Н๗О๗, сулеми (0,1) та відмивали в стерильній воді (один раз у 5–10 хв) за кількома схемами. Установлено вплив різних режимів стерилізації для отримання стерильних експлантів та введення в культуру рослин експлантів виду лайма Citrus aurantifolia та сортів лимона Мейєра і Ювілейний. Виявлено, що використання ступеневої стерилізації з використанням 2,5 % розчину гіпохлориту натрію дає високий відсоток стерильного життєздатного матеріалу – 27,7 %, що суттєво більше за інші варіанти досліду. Potted citrus plants are in constant demand, but the propagation of such plants requires the use of a winter greenhouse and several well-developed mother plants to obtain planting material. The use of microclonal propagation can accelerate the production of seed material though it requires detailed development of in vitro cultivation techniques. The aim of the research was to study the eff ectiveness of sterilizing substances and methods of sterilization on the yield of viable micro shoots of lime plants (Citrus aurantifolia) as well as Meyer and Jubilee lemon varieties and their growth in vitro. The research was conducted in the interdepartmental "Biotechnological Laboratory" of the Agrobiotechnological Faculty of Bila Tserkva NAU. The source material was microshoots from lime plants (Citrus aurantifolia), and lemon varieties (Citrus lemon) Meyer and Jubilee. The objects of the study were selected according to the diversity of genotypes, development type and varietal characteristics. The possibility of using different parts of plants for reproduction is a feature of in vitro culture. We used microshoots with a bud in our research. To neutralize the exogenous bacterial and fungal microfl ora, we used 70 % ethanol solution C2H5OH, sodium hypochlorite 5 %, 15 % solution of hydrogen peroxide H2O2 , sulema (0.1) and washed the material in sterile water (for 5–10 min) under several schemes. The study revealed the infl uence of diff erent sterilization regimes for obtaining sterile explants and the introduction into plant culture of explants of the species of lime Citrus aurantifolia as well as Meyer and Jubilee lemon varieties. It was found that the use of step sterilization using 2.5 % solutions of sodium hypochlorite gives a high percentage of sterile viable material – 27.7 %, which is signifi cantly higher than in other variants of the experiment.