1. Репозитарій Білоцерківського НАУ
  2. Факультети Університету
  3. БІОЛОГО-ТЕХНОЛОГІЧНИЙ ФАКУЛЬТЕТ
  4. Харчових технологій і технологій переробки продукції тваринництва
  5. Наукові публікації
Будь ласка, використовуйте цей ідентифікатор, щоб цитувати або посилатися на цей матеріал: http://rep.btsau.edu.ua/handle/BNAU/2448
Повний запис метаданих
Поле DCЗначенняМова
dc.contributor.authorОблап, Руслан Васильович-
dc.contributor.authorOblap, Ruslan-
dc.contributor.authorНовак, Наталія Борисівна-
dc.contributor.authorNovak, Natalia-
dc.contributor.authorСеменович, Володимир Костянтинович-
dc.contributor.authorSemenovych, Volodymyr-
dc.contributor.authorДимань, Тетяна Миколаївна-
dc.contributor.authorDyman, Tatyana-
dc.date.accessioned2019-08-01T11:11:09Z-
dc.date.available2019-08-01T11:11:09Z-
dc.date.issued2015-
dc.identifier.citationВизначення присутності глютену злакових культур у харчових продуктах методом ПЛР-РЧ / Р.В.Облап, Н.Б.Новак, В.К.Семенович, Т.М.Димань // Технологія виробництва і переробки продукції тваринництва: збірник наукових праць .- Біла Церква: БНАУ, 2015 .- Вип.1(116) .- С. 111-116.uk_UA
dc.identifier.issn2310-9289-
dc.identifier.urihttp://rep.btsau.edu.ua/handle/BNAU/2448-
dc.descriptionNowadays the design of modern technologies of production of specialized nutrition products is actual enough. Non-gluten products for people who has gluten entheropathy belong to this type of products. Celiac disease (gluten enteropathy) is an autoimmune hereditary disease and is characterized by persistent intolerance of gluten in such cereal as wheat, rye, barley and less oat. This is widespread disease, quantity of celiac-disease people is in range of 0,5–1%. Non-gluten diet during the whole life is the only method of cure and prevention of celiac-aftereffects. Modern high-sensitive and low-expensive test-systems are necessary for appropriate control of non-gluten foodstuffs. The aim of current study was the design of cereal gluten detection method and development and approbation of domestic real-time PCR-based test-system for gluten detection and identification in foodstuffs. Samples of wheat, rye, barley, oat and other cereals seeds, foodstuffs and raw material were matrices for genomic DNA isolation. DNA was extracted by CTAB-precipitation method with own modification. Glu B1-1 of wheat and Glu1-R of rye were target genes for gluten detection. Hor3 and 12S SSP genes were targets for barley and oat detection. TaqMan technology with it high sensitivity, specificity and rapidity of performance was used for test-system design. PCR conditions were as fol lows: 100 ng DNA, 10 mM Tris-HCl (pH 8,3), 50 mM KCl, 2,5 mM MgCl2, 0,2 mM dNTP-mix, 20 pkM each primers, 10 pkM probe and 1 U of Taq DNA polymerase (Thermo Scientific™, Lithunia). The applied cycles were: denaturation at 95 º-/3 min, followed by 45 cycles of 95 º-/15 s, annealing and synthesis at 60 or 65 º- /40 s. Proposed test-system is multiplex and consists of two PCR-mixes. One PCR-mix allows wheat, rye and oat DNA identification, another – for barley and psbA gene DNA identification. The latter was chosen as the species-specific PCR endogenous control. Behavior of each reaction was monitored by using of fluorescent-labeled probes FAM (12S SSP), ROX (Hor3), HEX (Glu1-R, psbA) and Cy5 (Glu B1-1). Optimization of amplification was performed for primers annealing temperature, MgCl2 concentration, concentration and ratio of primers and probes. The optimum values of concentrations was 2,5 ", for MgCl2, 20 pkM for primers and 10 pkM for probes. Effectiveness of test-system was performed for specificity, sensitivity, repeatability and reproducibility of results according to PCR test-systems design. Secale cereal, Triticum aestivum, Hordeum vulgare, Avena sativa, Fagopyrum esculentum, Oryza sativa, Zea mays, Glycine max, Brassica napus, Lycopersican esculentum, Solanum tuberosum were tested for specificity detection. Crossed reactions were not revealed. The sensitivity limit of developed test-system was detected by preparation of series of 10x DNA dilutions from 0,0001 __100 ng of genomic DNA. Sensitivity limit of system for genes Glu B1-1, Glu1-R, Hor3 and 12S SSP was 0,1 ng, for gene psbA – 0,001 ng. Our results agreed with data obtained by other authors and by use of commercial test-systems. Test-system approbation was conducted during 2013–2015 by comparative tests of foodstuffs with known content. Commercial ELISA and PCR test-systems RIDASCREEN® Gliadin and SureFood® ALLERGEN ID Gluten (R-Biopharm, Germany) were used for comparison. 53 foodstuffs and raw material samples were tested totally. Obtained data confirmed comparability of the developed test-system. Among 53 tested samples 43 (81 %) were non-gluten (< 5 mg/kg). In 10 (19%) remained samples gluten was identified from 4,6 mg/kg and more. Most of samples tested were not labeled as non-gluten products so the data has only informative effect. Conducted analysis confirmed the availability of developed test-system for testing and detection of wheat, rye, barley and oat in raw material (grain, flour), and in processed products (cereals, cookies, malt extracts). Besides, sensitivity of test-system allows the identification of so called «hidden» gluten, which can be found in products of industrial production as admixesstiffeners, form-building agents, stabilizers, wheat flour, starch etc.uk_UA
dc.description.abstractЗа використання TagMan-технології методу полімеразної ланцюгової реакції в режимі реального часу (ПЛР-РЧ) розроблено тест-систему для вичвлення та ідентифікації у продовольчій сировині і харчових продуктах чотирьох злакових культур (пшениці, жита, вівса і ячменю), глютен яких призводить до виникнення у людини захворювання на целіакцію. Тест-система уможливлює аналіз продуктів, які піддавались термічному обробленню, ферментації, гідролізу, її рівень чутливості достатній для виявлення так званого прихованого глютену. Апробацію тест-системи проведено на 53 зразках продовольчої сировини і харчових продуктів шляхом порівняльних випробувань за використання комерційних ІФА- та ПЛР-тест-систем-RIDASCREEN Gliadin та SureFood ALLERGEN ID Gluten (R-Diopharm, Німеччина) відповідно.За ефективністю роботи (специфічністю,чутливістю, повторюваністю та відтворюваністю результатів, розроблена система не поступається зарубіжним аналогам і є значно дешевшою.uk_UA
dc.language.isoukuk_UA
dc.publisherБілоцерківський національний аграрний університетuk_UA
dc.subjectглютенuk_UA
dc.subjectцеліакціяuk_UA
dc.subjectПЛР в режимі реального часуuk_UA
dc.subjectхарчові продуктиuk_UA
dc.subjectglutenuk_UA
dc.subjectceliac diseaseuk_UA
dc.subjectReal-Time PCRuk_UA
dc.subjectfood productsuk_UA
dc.titleВизначення присутності глютену злакових культур у харчових продуктах методом ПЛР-РЧuk_UA
dc.title.alternativeDetection of cereal gluten presence in foodstuffs by real-time PCRuk_UA
dc.typeСтаттяuk_UA
dc.identifier.udc577.2:575:57.08:658.562uk_UA
Розташовується у зібраннях:Наукові публікації

Файли цього матеріалу:
Файл Опис РозмірФормат 
Vyznachennia_prysutnosti.pdf223,15 kBAdobe PDFПереглянути/Відкрити
Показати базовий опис матеріалу Перегляд статистики


Усі матеріали в архіві електронних ресурсів захищені авторським правом, всі права збережені.